Identification of Muscarinic Receptor Subtypes in the Mucosa of the Bladder and Investigation of its Influence on the Detrusor Contractility In Vitro /// Идентификация на субтиповете мускаринови рецептори в мехурната лигавица и проучване на влиянието на уротела върху детрузорния контрактилитет in vitro

Abstract

Цел: Идентификация на субтиповете мускаринови рецепторни в мехурната лигавица и проучване на влиянието на уротела върху детрузорния контрактилитет in vitro. Материал и методи: Пикочен мехур на над сто прасета. Пикочен мехур след цистектомия от пациенти оперирани по повод карцином на пикочния мехур. Парчета тъкани се вземат от здрави места от пикочния мехур. Радиолигандно свързване с рецепторите намиращи се в лигавицата на пикочния мемхур чрез използване на различни мускаринови антагонисти за идентификация на субтиповете. Повлияване на контракцията чрез инхибиторите на нуклеотидната система в различни нива на клетъчния отговор. Резултати: Средната плътността на мускариновите рецептори в лигавицата бе 338.46- 22.43, а на детрузора 186.1- 37.36. рКi стойности съответно на Atropine бе 8.45- 0.33, Pirenzepine 6.18-0.05, Methoctramine 7.73-0.14, Oxybutynin 6.97-0.04 и на 4-DAMP 7.13 - 0.0. При 4- DAMP една малка част с стойност 10.2-0.19. Най-добро пасване на Hill Slope e при Pirenzepine със стойност 1.0-0.21. Максималният контрактилен отговор към Carbachol на изолиран детрузор с уротел, беше 40.3 4.4 пр. от това на контрола. По същия начин контракция на човешкия пикочен мехур бе потисната при наличието на лигавицата до 56.6 пр. от контрола. Инкубиране на тъканите с различни инхиботори на Нуклеотидната система не повлия върху инхибиращото действие на лигавицата. Заключение: Уротелът на прасета притежава по-плътно разпределение на мускариновите рецептори от колкото детрузорната мускулатура. Тази популация от мускариновите рецептори изглежда, че са M2 субтипове и M3 субтип в нищожни количества (- 20 пр.). Лигавицата на пикочния мехур / уротел/ не само на прасета и човека in vitro отделя дифузно, неизвестен за сега фактор наречен " Инхибиращ Фактор Отделящ от Уротела"/ ИФОУ/, който инхибира контракцията на детрузора.Този фактор се отделя при стимулация на детрузора с мускаринов агонист (Carbachol), Калиев Хлорид (KCl) както и Аденозин Три Фосфат(АТР). Нуклеотидната система като системата на клетъчния отговор на повечето клетки в организма не е замесена в отделянето на ИФОУ.

Aim of the study is the identification of muscarinic receptor subtypes in the mucosa of the bladder and investigation of its influence on the detrusor contractility in vitro. Material and methods: Fresh Bladder of over one hundred pigs was used. Bladder after cystectomy of the patients operated for bladder cancer was obtained. Pieces of tissues were taken from the healthy part of the bladder. Radioligand binding study to the receptors in the urothelium was performed by using different muscarinic antagonists for the identification of the receptors subtypes. Detrusor contraction was interrupted by inhibiting cell response of Nucleotide system at different level of the cell response. Results: Mean density of muscarinic receptors in the ruthenium was 338.46- 22.43, and in detrusor 186.1- 37.36 fmol prot -1. Values were as follows: Atropine 8.45- 0.33, Pirenzepine 6.18-0.05, Methoctramine 7.73-0.14, Oxybutynin 6.97-0.04 and 4-DAMP 7.13 - 0.0. A small quantity of 4- DAMP had pKi of 10.2-0.19. The best correlation of the Hill Slope is in Pirenzepine with the value of 1.0-0.21. The maximum contractile response to Carbachol of isolated detrusor muscle with an intact urothelium was 40.3 4.4 percent of the control. In a similar way contraction of the human detrusor was inhibited to 56.6 percent of the control in the presence of urothelium. Incubation with different inhibitors of the nucleotide system with the tissues with or without urothelium in advance did not make any difference to the inhibitory properties of the detrusor with an intact urothelium. Conclusion: Urothelium of pigs contains higher density of muscarinic receptors than the detrusor muscles. This population of muscarinic receptors seems to be M2 subtype and very small amount of M3 receptors (- 20 percent). The mucosa of the bladder not only of pigs, but in humans, in vitro, secrets an unknown inhibitory factor named Urothelium-derived inhibitory factor- UDIF, which inhibits detrusor contraction. This factor is secreted by the stimulation of detrusor with intact urothelium by muscarinic agonist (Carbachol), Potassium Chloride Adenosine Tri Phosphate. Urothelium derived factor in pig urothelium when stimulated by muscarinic agonist. Nucleotide system as a system of cell response of most of the cells in the organism is not involved in secreting the UDIF.